Антигенҳои сафедаи рекомбинантӣ аксар вақт якчанд эпитопҳои гуногун доранд, ки баъзеи онҳо эпитопҳои пайдарпай ва баъзеи онҳо эпитопҳои сохторӣ мебошанд.Антителоҳои поликлоналӣ, ки тавассути иммунизатсия кардани ҳайвонот бо антигенҳои денатуратшуда ба даст оварда шудаанд, омехтаҳои антителоҳои хоси эпитопҳои алоҳида мебошанд ва метавонанд дар маҷмӯъ барои ошкор кардани сохторҳои табиӣ ё сафедаҳои ҳадафи денатурат истифода шаванд.Бартарии паҳлӯи истифодаи сафедаҳои денатуратшуда ҳамчун иммуногенҳо дар он аст, ки сафедаҳои денатуратшуда бештар иммуногенӣ доранд ва метавонанд аксуламали иммунии қавӣ дар ҳайвонотро ҳавасманд кунанд.
Системаи ифодаи Escherichia coli одатан барои мақсадҳои антигенӣ интихоб карда мешавад, зеро он аз ҷиҳати вақт ва пул гаронтарин система аст.Барои беҳтар кардани имконияти ифодаи сафедаи мақсаднок ва роҳати тозакунӣ, баъзан танҳо як порчаи хурди сафедаи мақсаднок, ба монанди домени мушаххас, ифода карда мешавад.
Сохтори сеченакаи сафедаҳо
Домени мушаххаси протеин
Агар ҳадафи тайёр кардани антитело танҳо барои муайян кардани ВБ бошад, истифодаи пептиди хурди синтетикӣ ҳамчун антиген сарфакор ва зуд аст, аммо хатари иммуногении заиф ё регенӣ надоштан аз сабаби интихоби нодурусти сегменти пептид вуҷуд дорад.Азбаски тайёр кардани антитело муддати тӯлониро талаб мекунад, аксар вақт ду ё се сегменти пептидҳои гуногун барои омода кардани антителоҳо бо истифода аз антигени полипептидӣ интихоб карда мешаванд, то суръати муваффақияти таҷрибаро таъмин кунанд.
Тозагии антигени полипептидӣ барои иммунизатсия бояд аз 80% зиёд бошад.Гарчанде ки тозагии баландтар метавонад аз ҷиҳати назариявӣ антителоҳоро бо мушаххасоти беҳтар ба даст орад, аммо дар амал ҳайвонот ҳамеша миқдори зиёди антителоҳои ғайримуқаррариро ба вуҷуд меоранд ва ҳамин тавр манфиатҳои тозагии антигенро пинҳон мекунанд.
Илова бар ин, омода кардани антитело аз пептидҳои хурд бояд ба антигени интиқолдиҳандаи мувофиқ барои баланд бардоштани иммуногении он пайваст карда шавад.Ду интиқолдиҳандаи маъмули антигенӣ KLH ва BSA мебошанд.
Вақти фиристодан: 23 март-2023