Интиқоли энергияи резонанси флуоресцентӣ (FRET)
Интиқоли энергияи резонанси флуоресцентӣ (FRET) раванди интиқоли энергияи ғайрирадиатсионӣ мебошад, ки дар он энергияи ҳолати донор ба ҳолати ҳаяҷонбахши аксепторӣ тавассути таъсири мутақобилаи ҷуфтҳои электрикии байнимолекулавӣ интиқол дода мешавад.Ин раванд фотонҳоро дар бар намегирад ва бинобар ин радиатсионӣ нест.Ин таҳлил бартариҳои зуд, ҳассос ва содда буданро дорад.
Ранг, ки дар санҷиши FRET истифода мешавад, метавонад якхела бошад.Аммо дар аксари барномаҳо, рангҳои гуногун воқеан истифода мешаванд.Хулоса, интиқоли энергияи резонанси рӯшан ин интиқоли як ҷуфт диполҳо аз донор (ранг 1) ба аксептор (ранг 2) ҳангоми ҳаяҷонбахши гурӯҳи донорҳо мебошад.Умуман, спектри партовҳои гурӯҳи флюорофорҳои Донор бо спектри азхудкунии гурӯҳи Аксептор мувофиқат мекунад."Вақте ки масофаи байни ду флюорофор мувофиқ аст (10 - 100 A), интиқоли энергияи флюорофорро аз донор ба аксептор мушоҳида кардан мумкин аст."Усули интиқоли энергия аз сохтори химиявии ретсептор вобаста аст:
1. Ба ларзиши молекулавӣ табдил меёбад, яъне нури равшани интиқоли энергия нопадид мешавад.(Қабулкунанда як хомӯшкунандаи нур аст)
2. Пардохт нисбат ба худи ретсептор шадидтар аст, ки дар натиҷа дар спектри дуюмдараҷаи флуорессенсия сурхшавӣ ба амал меояд».(Ресепторҳо паҳнкунандаи нур мебошанд).
Гурӯҳи донорӣ (EDANS) ва гени аксепторӣ (DABCYL) ба субстрати табиии протеазаи ВИЧ яксон пайванданд ва вақте ки субстрат ҷудо нашавад, DABCYL метавонад EDANS-ро хомӯш кунад ва сипас ба фторин ғайриимкон гардад.Ҳангоми ҷудошавии протеазаи ВИЧ-1, EDANS дигар аз ҷониби DABCYL хомӯш карда намешавад ва баъдан люциферазаҳои EDANS-ро метавон ошкор кард.Мавҷудияти ингибиторҳои протеазро тавассути тағирот дар шиддатнокии флуорессенси EDANS назорат кардан мумкин аст.
Пептидҳои FRET асбобҳои мувофиқ барои омӯзиши ғайримуқаррарии пептидазҳо мебошанд.Азбаски раванди реаксияи он метавонад пайваста назорат карда шавад, он усули мувофиқро барои муайян кардани фаъолияти фермент таъмин мекунад.Тозае, ки пас аз гидролизи пайвандҳои пептидӣ аз ҷониби донор/қабулкунанда ҳосил мешавад, ченаки фаъолияти ферментҳоро дар консентратсияи наномолярӣ таъмин мекунад.Вақте ки пептиди FRET солим аст, он нопадид шудани флеши дохилиро нишон медиҳад, аммо вақте ки ягон пайванди пептидӣ дар муқобили донор/аксептор канда мешавад, он флеш мебарорад, ки онро пайваста ошкор кардан мумкин аст ва пас аз он фаъолияти ферментро метавон муайян кард.
Вақти интишор: 14 август-2023